Long non-coding RNA NORAD/miR-224-3p/MTDH axis contributes to CDDP resistance of esophageal squamous cell carcinoma by promoting nuclear accumulation of β-catenin
（杂志:Molecular Cancer，IF=27.401，河北医科大学）
MicroRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA，一个miRNA可以靶向几个不同基因进行调节，同时几个miRNAs也可以调节同一个基因。MiRNA可以与编码基因mRNA的3’UTR结合也可以直接与circRNA或lncRNA结合来调控相关基因的表达。
汉恒生物所使用的荧光素酶报告基因载体psi-CHECK2采用了萤火虫/海肾双荧光素酶双报告基因系统，其中海肾荧光素酶作为检测报告基因，而萤火虫荧光素酶则作为内参报告基因。验证miRNA与mRNA/lncRNA/circRNA的互作，将要研究的靶点序列（序列可以是mRNA的3’UTR，也可以是lncRNA/circRNA序列）插入到报告载体中，作为萤火虫荧光素酶的3‘UTR，与miRNA的mimic共同转染细胞，如果荧光素酶表达量下降（荧光信号下降），提示序列包含miRNA的靶点。
在验证circRNA/lncRNA与miRNA的靶点产生竞争性结合时，可以在转染报告质粒和mimics的基础上转染认为有竞争结合位点的circRNA/lncRNA过表达质粒或者将具有竞争性结合位点的circRNA/lncRNA敲低，观察R-Luciferase活性的改变。当过表达circRNA/lncRNA时荧光素酶活性升高，或者敲低circRNA/lncRNA时荧光素酶活性降低则表明他们之间存在对miRNA的竞争性结合，反之则不存在竞争性结合。
pSI-check2 质粒图谱
验证mir与其靶基因的相互作用最常用的方法便是双荧光素酶验证试验。
荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫 (Firefly) 体内和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase。
这两种荧光素酶作用方式不同。一是底物和辅助因子不同，萤火虫荧光素酶需要荧光素、O2、ATP 和 Mg2+，而海肾荧光素酶仅需要腔肠素（coelenterazine）和 O2。二是发光颜色不同，萤火虫荧光素酶产生黄绿色光，发光波长为 560 nm；而海肾荧光素酶产生蓝光，发光波长为 465 nm。常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等研究。
microRNA与靶基因结合验证：验证microRNA与靶基因（mRNA，lncRNA,circRNA）结合作用
ceRNA作用研究：验证不同把好基因对microRNA的竞争性结合作用
1、启动子报告质粒构建
2、miRNA靶基因报告质粒构建
3、单（双）荧光素酶检测试剂盒
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