2570Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy
（杂志:CELL，IF=41.582，上海交通大学附属仁济医院）
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
|---|---|---|
| HB-AP210 001 | 自噬双标腺病毒 | 1mL（1010PFU） |
| HB-LP210 0001 | 自噬双标慢病毒 | 1mL（108TU） |
| HB-AVP210 0001 | 自噬双标腺相关病毒 | 1mL(1012v.g) |
自噬（Autophagy），是指溶酶体中的水解酶非特异地降解细胞质中蛋白质、细胞器等底物的过程，它同时还受复杂信号精细调控，研究比较清楚的自噬通路有PI3K-I和PI3K-III、mTOR等。 自噬过程一般分为三个阶段： 自噬起始阶段、自噬小体形成阶段、自噬溶酶体阶段。它参与着肿瘤、衰老、炎症、免疫应答、心脑血管疾病、氧化应激、神经退行性疾病、代谢、发育等重要生物学过程。 自噬研究的切入角度： 通常除了研究自噬本身，更多的是把自噬作为一个机制来研究，如自噬如何参与肿瘤的发生发展、自噬如何参与肿瘤的耐药性、自噬如何参与炎症反应、自噬如何参与氧化应激、甚至自噬如何参与自闭症、阿尔兹海默症的发生与治疗等
调控自噬的主要信号通路和相关基因
1、LC3剪切的变化
2、电镜直接观察到自噬囊泡
3、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流
衡量自噬的三个“黄金标准”，分别是LC3的翻译后加工及脂化修饰（图A）、利用电镜直接观察自噬小体和自噬溶酶体的多少、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流（图B）。
主流自噬示踪工具一：mRFP-GFP-LC3 自噬双标腺病毒（现为mCherry-eGFP-LC3）
双荧光指示体系原理
mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。
我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。
如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。
红色且没有绿色的斑点代表自噬溶酶体（mRFP），黄色斑点代表自噬小体（RFP+GFP），（由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光）
Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy.
汉恒客户2017年发表于CELL，IF>30.
LC3产品列表
| 工具 | 产品类别 | 提供类型 |
|---|---|---|
| mcherry-GFP-LC3 | LC3自噬双标 | 慢病毒/腺病毒/AAV |
| GFP-LC3 | LC3自噬单标 | |
| mCherry-LC3 | 自噬单标 |
主流定位示踪工具二：p62
U2OS用GFP-p62和LC3-RFP同时标记。然后用60 μM 氯喹处理16hr。可以观察到二者有着明显的共定位。（当诱导自噬时，GFP-p62融合蛋白被招募到自噬小体上，呈现绿色小点。如果此时加入氯喹抑制自噬流， 那么GFP-p62就会累积在自噬小体和自噬溶酶体上）
p62产品列表
| 产品名称 | 默认规格 |
|---|---|
| 过表达p62慢病毒 | 108TU/ml，1ml |
| 过表达p62腺病毒 | 1010PFU/ml，1ml |
| 过表达p62腺相关病毒 | 1012v.g/ml，1ml |
| 过表达P62质粒 |
5ug |
选择性自噬定位工具: Keima探针
Keima探针研究核糖体选择性自噬的基本原理
自噬单标对于监测自噬体的形成较为有用，但不利于自噬流的整个过程进行动态检测，比如无法精确监测溶酶体是否参与，也无法示踪自噬体的成熟过程等。
如果想观察自噬流最好是用双标。
自噬病毒产品的细胞感染，和其他慢病毒/腺病毒产品类似，您购买后，会给您提供相应的病毒操作说明。请您根据操作说明进行细胞感染实验，建议您在正式实验前摸索细胞MOI值，以便于达到更优的感染效果。
对于在体自噬流监测，您根据需要感染的组织/器官选择合适的注射方式和注射体积。
在显微镜成像后，红绿荧光merge后出现的黄色斑点即只是自噬体，红色的斑点指示自噬溶酶体，通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱：一般统计采用人为计数的方法，也就是统计叠加（overlay）之后黄色斑点和红色斑点的数目，然后做出 bar 图。
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