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实验前质控
从源头把控细胞质量，避免身份错误与隐性污染影响后续编辑。
质控项
- 细胞来源可靠：汉恒采购细胞为中科院来源，提供 STR 鉴定报告，身份明确、无交叉污染。
- 客户细胞可选 STR 鉴定服务：用户提供细胞时，可在方案阶段加选 STR 鉴定。
- 支原体检测：细胞入库前完成支原体检测，排除常见隐性污染。
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CRISPR/Cas9 通过 sgRNA 引导 Cas9 核酸酶在基因组特定位点产生双链断裂，细胞在修复过程中产生插入或缺失突变，导致基因移码与功能丧失。
本服务主要采用慢病毒递送 CRISPR 系统（质粒系统亦可选择），可绕开部分细胞质粒转染效率低的问题，提高难转染细胞的编辑阳性细胞比例，为单克隆筛选提供足够的候选细胞。感染并富集后，通过有限稀释法挑取单克隆，扩增后获得基因型一致的单克隆敲除细胞株。
根据靶点数、编辑方式与调控需求，提供以下五类敲除服务，覆盖从常规功能丧失到时空特异性调控的研究场景。
针对单个目标基因设计 sgRNA，实现该基因的完全功能丧失。
同时针对多个目标基因设计 sgRNA 组合，实现多个基因的同时敲除。
在编码基因的编码区前端设计 sgRNA，引入非 3 倍数 indel，造成移码突变。
设计双gRNA 靶向基因两端，删除中间大段编码序列或功能结构域。
利用 Cre-loxP 系统或诱导型 Cas9 系统，实现时空特异性基因敲除。
从方案设计到冻存交付共 8 个节点：先完成靶点与 sgRNA 评估，再以慢病毒递送编辑元件，经药筛富集、有限稀释挑取单克隆后完成基因型鉴定，最终按标准规格冻存交付。整体周期取决于细胞系培养和感染特性，靶基因敲除难度与单克隆筛选轮次；若仅需验证 sgRNA 活性或做早期表型初筛，也可先选择混合克隆方案，具体排期请在方案阶段确认。
确认靶点与细胞系，评估可行性
每个靶点设计3–4 条sgRNA
克隆骨架，慢病毒包装与滴度测定
感染后抗性筛选/荧光富集
单细胞密度挑取单克隆
T 载体测序确认突变
克隆扩增冻存，备报告
冻存管或活细胞交付，含备份与报告
交付| 细胞类型 | 常用具体细胞株 | 编辑难度 | 经典应用场景 |
|---|---|---|---|
| 肿瘤细胞系 | A549、HepG2、HCT116、HeLa | 易 | 基因功能、增殖/凋亡、药物靶点验证 |
| 工具与模型细胞系 | HEK293 / HEK293T、CHO | 中 | 代谢研究、毒性评价、对照实验 |
| 免疫与血液细胞系 | THP-1、RAW264.7、Jurkat | 中 | 信号通路研究、基因编辑验证、血液/免疫相关基因功能与机制研究 |
| 干细胞 | 人iPSC、小鼠ESC | 较难 | 疾病建模、基因功能敲除模型构建、嵌合体实验 |
| 原代 / 初代细胞 | 原代 T 细胞、原代肝细胞 | 极难 | 免疫、药物代谢等生理相关机制研究 |
如不确定目标细胞系是否适用，可在方案阶段提供细胞系名称，我们将评估可行性与预期编辑效率。
Gene Function
敲除候选基因，观察表型变化，初步判断基因在细胞中的功能角色。
Target Validation
评估增殖、凋亡与药物敏感性，验证候选基因是否为有效药物靶点。
Pathway Analysis
多基因敲除以考察基因家族冗余，解析上下游信号通路的调控关系。
Disease Model
在疾病相关细胞系中引入敲除，结合后续组学分析构建体外疾病模型。
从细胞入库到最终交付，设置 实验前 → 实验中 → 交付前 三大阶段质控，逐项把关细胞身份、编辑效率与敲除性状，确保每一株交付细胞基因型明确、性状稳定。
从源头把控细胞质量，避免身份错误与隐性污染影响后续编辑。
质控项
在编辑与筛选各环节设卡，提高阳性比例与单克隆源性可靠性。
质控项
交付前完成基因型与性状确认，附完整报告与备份管。
质控项
| 交付项 | 规格 | 说明 |
|---|---|---|
| 敲除细胞株 | 冻存管形式或活细胞交付，含备份管 | 不低于 5×106 每管 |
| STR 鉴定报告（客户提供细胞可选） | 1 份 | 确认细胞身份，无交叉污染 |
| T 载体测序报告 | 1 份 | 确认突变类型与等位基因编辑情况 |
| 培养条件说明 | 1 份 | 含培养基、传代比例与冻存复苏建议 |
| 对照细胞 | 野生型或对照株 | 按项目需求确认是否包含 |
| WB 验证报告（可选） | 按需提供 | 蛋白水平佐证，需评估抗体可用性 |
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