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MicroRNA (miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸, miRNA进化保守数量种类丰富,而且不被翻译成蛋白质,但具有调控基因表达的重要功能。microRNA特点是能特异地结合到信使RNA(mRNA)内的互补区域以促进其降解或抑制翻译,miRNA广泛参与细胞增殖、分化、凋亡及细胞周期调控等过程,在基因实验中起着关键作用。
自1993年被发现MicroRNA(miRNA)以来,小RNA领域的进展和发现颠覆了科学界对基因调控的认识。从胚胎发育开始,到细胞凋亡,乃至肿瘤生长,miRNA在一系列生理和病理过程中发挥着重要的作用。想要了解更多miRNA发现与命名miRNA结构、niRNA特点、miRNA作用机制、miRNA功能等详情,可点击干货文章《参与几乎所有生理病理过程的miRNA》查看
miRNA的过表达可以使用miRNA的模拟物,或者将pri-mir构建至表达载体上。构建miRNA的下调即封闭,主要的技术是sponge技术或者miRNA inhibitor (miRNA互补单链的模拟物)来实现。sponge技术是通过将若干段连续miRNA成熟序列反向互补序列串联,使之在细胞内表达,吸附目标microRNA,达到下调miRNA的目的。
荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称,其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类荧光素酶。在荧光素酶的催化下,荧光素底物可以高效的转变成氧萤光素,同时发出强烈的光。 鉴于此,研究者利用荧光素酶开发出一套极其灵敏且使用方便的基因报告系统。目前这一系统被广泛用于miRNA靶基因的验证、转录因子结合位点与启动子活性分析、RNA降解、信号转导、药物筛选、动物活体成像等领域。
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