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然而,T细胞转染异常困难,普通的DNA质粒很难转染,即使是病毒介导的基因转染操作,也有不少难题,主要体现在几个方面:
1、常规的慢病毒、逆转录病毒,由于1)T细胞膜上受体的不稳定;2)非激活的T细胞本身无增殖能力;3)T细胞内部有阻碍反转录的机制等原因而导致慢病毒和逆转录病毒的T细胞感染能力偏弱,需要多次重复感染,且对于实验操作的条件要求十分苛刻。
2、体外培养的T细胞本身十分敏感且脆弱,慢病毒感染对细胞的状态影响较大。
3、T细胞是悬浮细胞,进一步增大了病毒有效感染的难度。
汉恒生物研发适用于原代T细胞的病毒有:T细胞专用慢病毒、悬浮细胞专用的腺病毒(Ads)。
1、高效感染免疫系统和造血系统等来源的可分裂型细胞
2、病毒感染具有人鼠细胞特异性。
3、可用来构建稳转细胞系
细胞:人原代CD4+ T细胞
刺激方式:CD3/CD28抗体和IL-2激活48h
病毒:hTLv-GFP慢病毒, 1*108 TU/ml
使用方式:MOI=50
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