请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?

2015-05-22   # 1

lncRNA 用慢病毒风险很大，慢病毒是RNA病毒，lncRNA的转录终止需要polyA，而polyA会导致慢病毒包装过程中，慢病毒基因组的表达提前终止，导致慢病毒包毒不成功。lncRNA很多的polyA需要外加，因为自身不一定带。还有一点，有些LncRNA会发生自切割，因此在包装的时候，转录出来的慢病毒基因组也可能因为lncRNA的自切割而发生断裂，导致包毒失败。还有就是有些公司不会在载体上加入lncRNA转录终止所需的polyA，这样的lncRNA能用慢病毒进行包装，且包出来的lncRNA可以用QPCR检测得到，但是这样表达出来的lncRNA比原始的lnc长度可能更长，功能也可能发生变化。建议LncRNA以DNA病毒为载体，腺病毒为LncRNA的良好兼容载体，针对LncRNA的表达，在腺病毒载体上局部引入polyA位点，适合LncRNA的表达。