包括：包膜质粒：pMD2.G，编码VSV-G；包装质粒：编码Gag，PoI，Rev与Tat基因；目的基因质粒：含有病毒的LTRs和psi包装信号，除非有内部启动子，否则这个目的质粒的目的基因是由5'LTR驱动的，它是一个弱启动子，需要Tat元件 的来激活它。第2代慢病毒目的质粒必须要用第2代慢病毒包装系统，不能用第三代的包装系统，因为它的LTR是Tat依赖性的，而第三代删除了tat元件。