WB检测

WB结果种无条带信号，可以从抗体、抗原、实验操作和缓冲液这几个方面分析。1）抗体：二抗是否选择合适，抗体浓度是否合适？抗体是否适用于WB，抗体是否失效等；2）抗原：抗体是否能识别抗原？目的蛋白量是否足够，是否发生降解？一般每个泳道的蛋白量不低于20-30 µg，加蛋白酶抑制剂并设置阳性对照；3）实验操作：转膜不充分？洗膜次数过多？4）缓冲液相关原因：封闭液与一抗或二抗有交叉反应？ECL发光液失活？显色方式是否选择合适？一般ECL显色比DAB显色灵敏度高5-10倍。