做miRNA干扰时,用qPCR检测不到miRNA表达下调是什么原因?
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梧桐树下
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2023-11-10 •
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最后更新于 2023-11-10
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miRNA干扰则基本上不适合用qPCR检测敲低水平,它本质上都是用成熟体的反义序列对其进行结合,进而阻断miRNA与靶基因结合。总的来说,检测不到miRNA水平下降是因为并没有被降解,只是位点被反义链封闭,使其功能受到了抑制。所以即使检测不到下调,也不能代表没有抑制,可以通过检测其靶基因的表达变化来验证。那么miRNA与反义链形成双链RNA没有被降解的原因主要为:
(1)反义RNA与miRNA结合后,序列很短,导致细胞内负责降解双链RNA的Dicer酶不能有效结合,而无法降解。
(2)miRNA以RISC复合物的形式存在,该复合物也会使Dicer酶无法高效结合。
(3)miRNA海绵属于不完全互补的反义RNA重复,也可以防止被降解。