做免疫沉淀（IP）实验时，最后沉淀下来的目的蛋白量较低，一般是什么原因导致的？有什么建议吗？

IP拉下来的目的蛋白量较少主要可能是三个原因：①可能是IP抗体的亲和力不足；②另一个原因可能是目的蛋白本身的表达量较低；③裂解细胞时蛋白被降解。如果是抗体的问题，就需要更换新抗体了，对于新抗体可以先测试亲和性和特异性，评估效果好再继续用于正式实验。如果是蛋白本身表达量低，可以通过外源性过表达的方式来提高表达水平；如果是遇到目的蛋白没有合适的抗体，还可以融合表达如3×flag之类的蛋白标签，借助蛋白标签的抗体进行免疫沉淀。此外，在裂解细胞的同时加入蛋白酶抑制剂，可以防止蛋白降解的情况。